Plasmide Double Nickase (h) CD71/TFRC/Transferrin Receptor: sc-400310-NIC

TFRC (CD71) code le récepteur de la transferrine, une glycoprotéine membranaire de type II qui assure l’endocytose, dépendante de la clathrine, du fer lié à la transferrine et contribue à l’homéostasie du fer cellulaire. Le trafic et le recyclage du récepteur sont couplés à l’acidification des endosomes, à la libération du fer et à la coordination de processus dépendants du fer, notamment la respiration mitochondriale, la synthèse de l’hème et l’activité de la ribonucléotide réductase nécessaire à la synthèse de l’ADN. L’expression de TFRC est étroitement régulée par la signalisation élément de réponse au fer/protéine régulatrice du fer (IRE/IRP) et corrèle souvent avec l’état prolifératif en raison d’une demande accrue en fer. Les altérations de la gestion du fer liée à TFRC sont étudiées dans des contextes tels que l’anémie, la neurodégénérescence, la biologie des infections et le métabolisme des cellules tumorales, où une modification de l’absorption du fer peut influencer le stress oxydatif et les programmes de croissance.

CD71/TFRC/Transferrin Receptor Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus TFRC dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de TFRC. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de TFRC. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de TFRC.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.