CD35 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401210

Übersicht

CR1 kodiert CD35, einen membranständigen Komplementrezeptor, der an die Opsonine C3b/C4b bindet und die Elimination von Immunkomplexen fördert sowie zugleich die Komplementaktivierung auf Zelloberflächen reguliert. CD35 ist an der angeborenen Immunerkennung beteiligt und verknüpft das Komplementsystem mit adaptiven Immunantworten, indem es die Antigenverarbeitung und die B‑Zell-Signalgebung moduliert; es wird auf Erythrozyten, Leukozyten und follikulären dendritischen Zellen exprimiert. Durch die Kontrolle der Verstärkung der Komplementkaskade und der phagozytären Aufnahme beeinflusst CR1 die inflammatorische Homöostase und die Anfälligkeit für komplementvermittelte Gewebeschäden. Genetische Variation und eine veränderte CR1/CD35-Expression wurden mit Immunfehlregulation und entzündlichen Erkrankungen in Verbindung gebracht und außerdem in Kontexten wie Neuroinflammation und Wirt–Pathogen-Interaktionen bei Infektionskrankheiten untersucht.

Das CD35 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des CR1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des CR1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von CR1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die CD35-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von CR1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der CD35-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf CR1-Exone abzielen, die für die CD35-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere CR1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom CD35 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom CD35 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des CR1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das CD35 HDR-Plasmid (h) und CD35 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von CR1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten CR1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.