CD3-ζ/η CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-419556

Übersicht

Cd247 kodiert die CD3ζ/η‑Signaleinheit des T‑Zellrezeptor(TCR)-Komplexes, einen Adapter mit immunrezeptor‑tyrosinbasiertem Aktivierungsmotiv (ITAM), der die Antigenerkennung mit intrazellulären Phosphorylierungskaskaden koppelt. Nach Bindung des TCR rekrutieren und aktivieren die ITAMs von CD3ζ/η Kinasen wie LCK und ZAP70, fördern die Assemblierung des LAT/SLP‑76‑Signalosoms und aktivieren nachgeschaltete MAPK‑, NF‑κB‑ und NFAT‑Signalwege, die T‑Zell‑Aktivierung, Zytokinproduktion und Überleben steuern. Eine veränderte CD247‑Expression oder -Signalübertragung trägt zu einer verminderten T‑Zell‑Reaktionsfähigkeit und Immundysregulation bei und wurde mit entzündlichen und autoimmunen Phänotypen sowie mit immunologischer Tumorflucht im Mikromilieu in Verbindung gebracht. In Mäusen wird die Störung von Cd247 häufig genutzt, um thymische Selektion, periphere Toleranz sowie Effektor‑ gegenüber erschöpften T‑Zell‑Zuständen zu untersuchen.

Das CD3-ζ/η CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Cd247-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Cd247-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Cd247 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die CD3-ζ/η-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Cd247-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der CD3-ζ/η-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Cd247-Exone abzielen, die für die CD3-ζ/η-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Cd247-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom CD3-ζ/η CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom CD3-ζ/η CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Cd247-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das CD3-ζ/η HDR-Plasmid (m) und CD3-ζ/η HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Cd247-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Cd247-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.