CCDC25 Double Nickase Plasmid (h): sc-408656-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das CCDC25 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- CCDC25 Double-Nickase-Plasmid (h) und CCDC25 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CCDC25 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: CCDC25: sc-515201
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
CCDC25 Double Nickase Plasmid (h) | sc-408656-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CCDC25 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-408656-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das humane Gen **CCDC25** kodiert ein Protein mit Coiled-Coil-Domäne, dem eine Rolle als Gerüst für Protein-Protein-Interaktionen sowie für die räumliche Organisation von Signal- oder Strukturkomplexen zugeschrieben wird. Coiled-Coil-Proteine sind häufig an der Regulation des Zytoskeletts, am membranassoziierten Transport (Trafficking) und an der Koordination der Zellpolarität beteiligt, was darauf hindeutet, dass CCDC25 die zelluläre Architektur und deren dynamischen Umbau beeinflussen kann. Eine veränderte Expression oder Störung von Komponenten des Coiled-Coil-Netzwerks wurde mit dysregulierter Proliferation, Migration und Stressantworten in Verbindung gebracht, wodurch CCDC25 zu einem relevanten Ziel für mechanistische Studien in der Krebsbiologie und verwandten pathophysiologischen Kontexten wird. Die Untersuchung der CCDC25-Funktion kann dazu beitragen zu klären, wie Coiled-Coil-vermittelte Assemblierungen Signal- und Strukturwege integrieren, die das Zellverhalten prägen.
CCDC25 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CCDC25-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CCDC25 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CCDC25-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CCDC25-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.