CBP/KAT3A/CREBBP Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400200-ACT

O CREBBP codifica a proteína de ligação ao CREB (CBP/KAT3A), um coativador transcricional e acetiltransferase de lisina que acetila histonas e substratos não histónicos para modular a acessibilidade da cromatina e a expressão génica. A CBP integra sinais do CREB, de recetores nucleares e de fatores de transcrição do desenvolvimento, coordenando programas envolvidos no controlo do ciclo celular, respostas a danos no DNA, diferenciação e plasticidade neuronal. Através das suas funções em enhancers e no alongamento transcricional, a CBP participa em vias como a sinalização cAMP/CREB e numa regulação epigenética mais ampla da transcrição específica de linhagem. Alterações na atividade ou na dosagem de CREBBP estão associadas a fenótipos do neurodesenvolvimento e são recorrentemente implicadas em desregulação transcricional e da cromatina associada ao cancro.

CBP/KAT3A/CREBBP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CREBBP sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CBP/KAT3A/CREBBP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CREBBP em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CREBBP, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CBP/KAT3A/CREBBP. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CREBBP nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CBP/KAT3A/CREBBP no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CBP/KAT3A/CREBBP em células tumorais com expressão de CREBBP silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.