Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Cbl Double Nickase Plasmid (h): sc-400561-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Cbl Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Cbl Double-Nickase-Plasmid (h) und Cbl Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CBL abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Cbl: sc-1651
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Cbl Double Nickase Plasmid (h) | sc-400561-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Cbl Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400561-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CBL kodiert Cbl, eine E3-Ubiquitin-Ligase und Adapterprotein, das die Herunterregulation aktivierter Rezeptor- und Nichtrezeptor-Tyrosinkinasen koordiniert. Über seine TKB-Domäne und die RING-Finger-abhängige Ubiquitinierungsaktivität fördert Cbl den ubiquitinvermittelten Transport und Abbau von Signalkomplexen und prägt damit die Outputs von Signalwegen wie EGFR/RTK, MAPK/ERK, PI3K–AKT sowie der Signalübertragung über Immunrezeptoren. Cbl trägt außerdem zur Endozytose, zur Proteinkontrolle/-qualitätskontrolle und zur Rückkopplungsregulation von Intensität und Dauer der Signaltransduktion bei. Eine Fehlregulation oder Mutation von CBL wird mit aberranter Tyrosinkinase-Signalgebung und der Biologie hämatologischer Erkrankungen in Verbindung gebracht und macht CBL zu einem nützlichen Knotenpunkt zur Untersuchung onkogener Signalnetzwerke und regulatorischer Schaltkreise in Immunzellen.
Cbl Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CBL-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CBL abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CBL-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CBL-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.