cathepsin Z CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-403244

Übersicht

CTSZ kodiert Cathepsin Z (Cathepsin X), eine lysosomale Cysteinprotease, die am intrazellulären Proteinumsatz und an der Peptidverarbeitung innerhalb des Endo‑Lysosomen-Systems beteiligt ist. Cathepsin Z kann Zelladhäsion und -migration modulieren – über Interaktionen, an denen sein RGD-Motiv beteiligt ist, sowie durch die Beeinflussung von Proteasenetzwerken, die das extrazelluläre Milieu umgestalten. Seine Aktivität steht mit Antigenprozessierung und entzündlicher Signalübertragung in Immunzellen in Zusammenhang und verbindet CTSZ mit Signalwegen, die angeborene und adaptive Immunantworten steuern. Eine fehlregulierte CTSZ-Expression oder -Aktivität wurde mit Tumorinvasions-Phänotypen sowie mit neuroinflammatorischen oder neurodegenerativen Kontexten in Verbindung gebracht, was es zu einem nützlichen Ziel für mechanistische Studien zur Proteostase und zu immunologischen Mikroumgebungen macht.

Das cathepsin Z CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des CTSZ-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des CTSZ-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von CTSZ nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die cathepsin Z-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von CTSZ-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der cathepsin Z-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf CTSZ-Exone abzielen, die für die cathepsin Z-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere CTSZ-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom cathepsin Z CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom cathepsin Z CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des CTSZ-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das cathepsin Z HDR-Plasmid (h) und cathepsin Z HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von CTSZ-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten CTSZ-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.