cathepsin D CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419875

概要

マウスCtsdは、細胞内タンパク質のターンオーバーおよびエンドリソソーム恒常性の維持に重要な、リソソーム局在のアスパラギン酸エンドペプチダーゼであるカテプシンDをコードしています。カテプシンDは、オートファジーフラックス、リソソーム依存的分解、ならびに生理活性ペプチドのプロセシングに関与し、それによって抗原処理や、より広範なプロテオスタシス（タンパク質恒常性）ネットワークに影響を及ぼします。CTSD活性の破綻は、リソソーム機能障害、神経細胞の脆弱性、炎症シグナルの変化と関連しており、神経変性や代謝ストレス応答の研究において重要です。細胞および動物モデルでは、Ctsdはリソソーム機能、アポトーシス、ミトコンドリア品質管理経路の相互作用（クロストーク）を解析する目的でも用いられます。

cathepsin D CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるCtsd遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Ctsd内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Ctsdのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、cathepsin Dタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、cathepsin Dシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Ctsd欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• cathepsin Dの機能に不可欠なCtsdエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Ctsdゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• cathepsin D CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびcathepsin D CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Ctsd遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  cathepsin D HDRプラスミド（m）および cathepsin D HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCtsdホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCtsd標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。