Plásmido Doble Nickase (h) caspase-10: sc-416840-NIC

CASP10 codifica la caspasa-10, una proteasa iniciadora de cisteína-aspartato que se recluta a complejos de señalización inductores de muerte aguas abajo de receptores de apoptosis extrínseca como FAS y TNFRSF10 (receptores de TRAIL). Tras su activación, la caspasa-10 procesa y amplifica la señalización apoptótica mediante caspasas efectoras aguas abajo y la comunicación cruzada con vías mitocondriales, modulando las decisiones de destino celular durante la homeostasis inmunitaria y el estrés inflamatorio. La actividad de CASP10 se integra con contextos de señalización de NF-κB y de citocinas, en los que los desenlaces apoptóticos frente a no apoptóticos influyen en la supervivencia y activación de los linfocitos. La variación genética o la desregulación de CASP10 se ha vinculado con fenotipos de desregulación inmunitaria y con una sensibilidad alterada a la apoptosis en la biología de tumores hematológicos y sólidos, lo que la hace relevante para estudios mecanísticos de la señalización mediada por receptores de muerte.

caspase-10 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CASP10 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CASP10. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CASP10. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CASP10 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.