Plásmido CRISPR de Activación (h) CASK: sc-401742-ACT

CASK codifica una proteína de andamiaje MAGUK (guanilato quinasa asociada a membrana) asociada a la membrana, que organiza complejos multiproteicos en sinapsis y uniones célula–célula, acoplando moléculas de adhesión y canales iónicos con reguladores de señalización y del citoesqueleto. En neuronas humanas, CASK participa en el tráfico de vesículas sinápticas, la neurotransmisión y la regulación génica dependiente de la actividad, con funciones vinculadas a la señalización de calcio/calmodulina y a programas de polaridad en uniones. La alteración de la dosis o de la función de CASK se ha asociado a fenotipos del neurodesarrollo, como discapacidad intelectual, epilepsia y microcefalia, lo que respalda su utilidad como nodo para estudiar el ensamblaje sináptico y la maduración neuronal. Estas características hacen de CASK una diana relevante para desentrañar las vías que gobiernan la conectividad neuronal, la excitabilidad y las redes de señalización dependientes de andamiajes.

CASK El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CASK sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CASK El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CASK en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CASK, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CASK. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CASK y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CASK en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CASK en células tumorales con expresión de CASK silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.