Plásmido CRISPR de Activación (h) casein kinase IIα: sc-418515-ACT

CSNK2A1 codifica la subunidad alfa catalítica de la caseína quinasa II (CK2α), una quinasa de serina/treonina constitutivamente activa que fosforila un amplio espectro de sustratos nucleares y citoplasmáticos. CK2α integra señales a través de vías centrales que controlan la progresión del ciclo celular, las respuestas al daño del ADN, la dinámica de la cromatina, la transcripción y la traducción, con funciones documentadas en las redes de señalización Wnt/β-catenina, NF-κB, PI3K–AKT y MAPK. Mediante la regulación de la apoptosis, la proteostasis y la adaptación al estrés, CK2α contribuye a la homeostasis celular en múltiples contextos tisulares. La actividad o expresión alterada de CSNK2A1 se ha asociado con proliferación desregulada y fenotipos del desarrollo, lo que respalda su utilidad como un nodo mecanístico en la investigación de señalización relevante para enfermedades.

casein kinase IIα El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CSNK2A1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

casein kinase IIα El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CSNK2A1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CSNK2A1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de casein kinase IIα. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CSNK2A1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de casein kinase IIα en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía casein kinase IIα en células tumorales con expresión de CSNK2A1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.