Particules Lentivirales d'Activation (h) CARM1: sc-404087-LAC

CARM1 (coactivator-associated arginine methyltransferase 1 ; PRMT4) est une méthyltransférase des arginines protéiques qui catalyse la diméthylation asymétrique de l’histone H3 (p. ex., H3R17/H3R26) ainsi que de multiples substrats non histoniques, afin de réguler la transcription, la maturation de l’ARN et l’architecture de la chromatine. Grâce à ses fonctions de coactivateur avec les récepteurs nucléaires et des facteurs de transcription, CARM1 influence des programmes contrôlant la progression du cycle cellulaire, la différenciation, les réponses aux dommages de l’ADN et l’expression génique dépendante des signaux. La méthylation médiée par CARM1 s’articule avec des voies épigénétiques impliquant p300/CBP, le remodelage de la chromatine par SWI/SNF et les complexes d’élongation transcriptionnelle, façonnant une transcription spécifique de lignée et sensible au stress. Une activité et une expression dérégulées de CARM1 ont été associées à des réseaux transcriptionnels oncogéniques et à une plasticité cellulaire altérée, ce qui souligne sa pertinence pour les études en biologie du cancer et en signalisation hormonodépendante.

Les particules d'activation lentivirales CARM1 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de CARM1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales CARM1 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription CARM1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de CARM1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif CARM1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.