Plasmide CRISPR d'Activation (m) CARD 9: sc-436080-ACT

La Card9 murine code CARD9, une protéine adaptatrice cytosolique qui relie les récepteurs de reconnaissance des motifs (PRR) aux voies de signalisation inflammatoires en aval dans les cellules myéloïdes. CARD9 est un médiateur clé des voies des récepteurs aux lectines de type C et contribue à l’activation des programmes NF-κB et MAPK qui façonnent la production de cytokines, les réponses antimicrobiennes et les états de différenciation des cellules myéloïdes. Par son rôle dans la transduction des signaux de l’immunité innée, une activité altérée de CARD9 est associée à une dérégulation de la défense de l’hôte et à des phénotypes liés à l’inflammation dans des modèles expérimentaux, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de la biologie des infections et de l’homéostasie immunitaire. Card9 est donc fréquemment utilisé pour explorer la logique de signalisation en amont des récepteurs et les sorties transcriptionnelles dans les macrophages, les cellules dendritiques et les cellules de la lignée neutrophile.

CARD 9 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Card9 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CARD 9 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Card9 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Card9, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CARD 9. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Card9 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CARD 9 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CARD 9 dans les cellules tumorales présentant une expression de Card9 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.