Plásmido Doble Nickase (h) CaMKIV: sc-400806-NIC

CAMK4 codifica la proteína quinasa IV dependiente de calcio/calmodulina (CaMKIV), una quinasa de serina/treonina que transmite señales de Ca2+ desde la calmodulina hacia programas de transcripción nuclear. CaMKIV se activa aguas abajo de CaMKK y regula la fosforilación de factores de transcripción como CREB y MEF2, vinculando la dinámica del calcio con la expresión génica, la plasticidad neuronal y la diferenciación dependiente de la actividad. La quinasa participa en vías que controlan la activación de células inmunitarias y respuestas transcripcionales relacionadas con citocinas, y su desregulación se ha estudiado en contextos que incluyen fenotipos del neurodesarrollo y neuropsiquiátricos, así como trastornos asociados al sistema inmunitario. Como regulador nuclear sensible al Ca2+, CaMKIV se utiliza con frecuencia para investigar la transcripción acoplada a estímulos y la señalización asociada a la cromatina en modelos celulares humanos.

CaMKIV El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CAMK4 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CAMK4. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CAMK4. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CAMK4 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.