Plasmide CRISPR d'Activation (h) CaMKIV: sc-400806-ACT

Le gène humain **CAMK4** code **CaMKIV**, une kinase sérine/thréonine nucléaire dépendante du Ca²⁺/calmoduline, qui couple les transitoires calciques à des programmes transcriptionnels contrôlant la plasticité neuronale, l’activation des cellules immunitaires et l’expression de gènes liée au cycle cellulaire. CaMKIV est activée en aval de CaMKK et intègre des signaux provenant de l’entrée de calcium et des voies des RCPG afin de phosphoryler des régulateurs transcriptionnels tels que CREB et de moduler des processus associés à la chromatine. Par ces mécanismes, elle influence la différenciation et l’induction génique dépendante des stimuli dans les neurones et les lymphocytes, avec des associations rapportées à une dérégulation de la signalisation inflammatoire et à des phénotypes neuropsychiatriques. La position de cette voie fait de **CAMK4** un nœud utile pour disséquer la transcription dépendante du calcium, la signalisation synaptique et les réseaux de régulation immunitaire.

CaMKIV Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CAMK4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CaMKIV Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CAMK4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CAMK4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CaMKIV. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CAMK4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CaMKIV au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CaMKIV dans les cellules tumorales présentant une expression de CAMK4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.