CaMKII delta CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400811-ACT

CAMK2D kodiert die Delta-Isoform der Ca2+/Calmodulin-abhängigen Proteinkinase II (CaMKII delta), eine Serin/Threonin-Kinase, die intrazelluläre Calciumtransienten in phosphorylierungsabhängige Signalantworten übersetzt. CaMKII delta reguliert die Erregungs‑Kontraktions‑Kopplung, die Calciumhomöostase und aktivitätsabhängige Transkriptionsprogramme über Zielstrukturen, die von Ionenkanälen und Proteinen des sarkoplasmatischen Retikulums bis hin zu nachgeschalteten Effektoren einschließlich MAPK‑ und CREB‑assoziierter Netzwerke reichen. In menschlichen Geweben ist die CAMK2D-Aktivität eng mit der kardialen und vaskulären Signalübertragung verknüpft, wobei eine veränderte Regulation von CaMKII delta stressantwortliche Signalwege, die Elektrophysiologie und zelluläres Remodeling umgestalten kann. Fehlregulierte Calciumsignale und CaMKII-abhängige Phosphorylierungsereignisse wurden mit kardiovaskulären Erkrankungen sowie mit weiter gefassten Störungen calciumabhängiger Signalwege in Verbindung gebracht, die für mechanistische Krankheitsstudien relevant sind.

CaMKII delta Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CAMK2D-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

CaMKII delta Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CAMK2D-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CAMK2D-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen CaMKII delta-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CAMK2D-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von CaMKII delta-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des CaMKII delta-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CAMK2D-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.