CaMKII beta Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402744-ACT

CAMK2B codifica a subunidade beta da CaMKII, uma quinase de serina/treonina dependente de Ca2+/calmodulina que integra transientes intracelulares de cálcio em programas de fosforilação que controlam a sinalização sináptica e a plasticidade estrutural. A CaMKII beta contribui para a montagem do holoenzima, o direcionamento subcelular e as interações com o citoesqueleto de actina, que moldam a remodelação das espinhas dendríticas e a neurotransmissão dependente de atividade. Em neurônios, CAMK2B participa de vias associadas à sinalização do receptor NMDA, à potenciação de longa duração/depressão de longa duração e à regulação gênica dependente de cálcio. A desregulação da sinalização de CaMKII e alterações em redes associadas a CAMK2B têm sido implicadas em fenótipos do neurodesenvolvimento e neuropsiquiátricos, sustentando seu uso como um nó mecanístico para estudar a função e a plasticidade de circuitos neuronais.

CaMKII beta O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CAMK2B sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CaMKII beta O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CAMK2B em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CAMK2B, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CaMKII beta. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CAMK2B nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CaMKII beta no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CaMKII beta em células tumorais com expressão de CAMK2B silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.