Plasmide Double Nickase (h) Calregulin: sc-400775-NIC

Le gène humain **CALR** code la **calréticuline**, une chaperonne luminale du réticulum endoplasmique (RE) et une protéine de liaison au Ca²⁺ à forte capacité, qui favorise le repliement des glycoprotéines et le contrôle qualité via le cycle calnexine/calréticuline ainsi que la dégradation associée au RE (ERAD). La calréticuline régule l’homéostasie intracellulaire du calcium et interfère avec la signalisation du stress du RE et la réponse aux protéines mal repliées (UPR), influençant l’apoptose, l’adhérence cellulaire et des processus immunitaires par des modifications de la signalisation dépendante du calcium. Une activité dérégulée de **CALR** a été associée à une protéostase altérée et à l’adaptation au stress en biologie du cancer, ainsi qu’à des mutations de **CALR** liées aux néoplasies myéloprolifératives, qui perturbent les réseaux de signalisation en aval. Ces caractéristiques font de **CALR** une cible fréquemment étudiée, à l’interface entre protéostase du RE, signalisation calcique et réponses cellulaires au stress.

Calregulin Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CALR dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CALR. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CALR. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CALR.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.