Plasmide Double Nickase (h) Calpain reg: sc-403478-NIC

CAPNS1 code la petite sous-unité régulatrice nécessaire à la stabilité et à l’activité des complexes de protéases à cystéine calpaïne‑1 et calpaïne‑2, ubiquitaires. La signalisation des calpaïnes assure une protéolyse limitée de protéines du cytosquelette et de signalisation, modulant le renouvellement des adhérences focales, la dynamique membranaire et le remodelage dépendant du calcium lors de la migration cellulaire, de la progression du cycle cellulaire et de l’apoptose. Via le clivage de substrats impliqués dans les voies NF‑κB, MAPK et associées aux intégrines, CAPNS1 peut influencer la signalisation inflammatoire et les réponses au stress. Une activité des calpaïnes dérégulée a été associée à l’invasivité des cellules cancéreuses, à la neurodégénérescence, ainsi qu’à des atteintes cardiovasculaires et métaboliques, faisant de CAPNS1 un nœud pertinent pour des études mécanistiques de la protéostasie et des réseaux de signalisation pilotés par le calcium.

Calpain reg Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CAPNS1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CAPNS1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CAPNS1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CAPNS1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.