Calnexin Double Nickase Plasmid (m): sc-419436-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Calnexin Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Calnexin Double-Nickase-Plasmid (m) und Calnexin Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Canx abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Calnexin: sc-23954
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Calnexin Double Nickase Plasmid (m) | sc-419436-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Calnexin Double Nickase Plasmid (m2) | sc-419436-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das Mausgen **Canx** kodiert **Calnexin**, ein im ER (endoplasmatischen Retikulum) ansässiges Lektin-Chaperon, das an monoglukosylierte N‑gebundene Glycane bindet und so die Faltung und Qualitätskontrolle neu synthetisierter Glykoproteine fördert. Calnexin wirkt innerhalb des Calnexin/Calreticulin‑Zyklus in Koordination mit **ERp57** und verwandten Oxidoreduktasen und verknüpft dadurch die Glykoproteinreifung mit dem ER‑assoziierten Abbau (**ERAD**) und der Antwort auf fehlgefaltete Proteine (**UPR**). Durch die Regulation von Transport und Stabilität membranständiger und sekretierter Proteine beeinflusst Calnexin die Proteostase, den Umgang mit oxidativem Stress sowie die Biogenese immunrelevanter Rezeptoren. Eine gestörte, calnexinabhängige Qualitätskontrolle wurde in experimentellen Modellen mit ER‑Stress‑Phänotypen und veränderten Signalausgängen in Verbindung gebracht, die für Neurodegeneration, metabolische Dysfunktion und entzündliche Signalwege relevant sind.
Calnexin Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Canx-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Canx abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Canx-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Canx-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.