Plasmide Double Nickase (h) Calnexin: sc-400154-NIC

Le gène humain **CANX** code la **calnexine**, une chaperonne lectine membranaire du **réticulum endoplasmique (RE)** qui se lie aux **glycanes N-liés monoglucosylés** afin de favoriser le repliement et le contrôle qualité des glycoprotéines naissantes. La calnexine fonctionne au sein du **cycle calnexine/calréticuline**, aux côtés d'**ERp57**, pour coordonner la formation des ponts disulfure, la rétention des clients mal repliés et les décisions de trafic dans la voie sécrétoire. Par son rôle dans la protéostasie du RE, **CANX** s'articule avec la **réponse aux protéines mal repliées (UPR)**, la **dégradation associée au RE (ERAD)** et la signalisation du stress cellulaire, susceptibles de remodeler la présentation des antigènes et les programmes de survie cellulaire. Un repliement dépendant de la calnexine dérégulé et le stress du RE sont fréquemment étudiés dans le contexte des maladies de mauvais repliement des protéines, de l'inflammation métabolique et des exigences sécrétoires oncogéniques, faisant de **CANX** un nœud fonctionnel pour l'exploration mécanistique des voies biologiques.

Calnexin Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CANX dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CANX. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CANX. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CANX.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.