Caldesmon Double Nickase Plasmid (h): sc-402040-NIC

CALD1 kodiert Caldesmon, ein Aktin- und Calmodulin-bindendes Protein, das Aktomyosin-Interaktionen moduliert und die zytoskelettale Architektur in glatter Muskulatur sowie in nichtmuskelartigen Zellen stabilisiert. Durch die calciumabhängige Regulation der Aktinfilament-Dynamik und der Myosin-ATPase-Aktivität koordiniert Caldesmon die Organisation von Stressfasern, den Umsatz fokaler Adhäsionen und kontraktile Antworten, die Zellform und Motilität beeinflussen. Die Funktion von CALD1 überschneidet sich mit Rho-GTPase-getriebenem Zytoskelett-Remodeling und Signalwegen, die mechanische Spannung mit Transkriptionsprogrammen koppeln. Eine veränderte Caldesmon-Expression oder ein verschobenes Isoformgleichgewicht wurde mit Veränderungen von Zellmigrations- und Invasionsphänotypen in der Krebsbiologie sowie mit einer dysregulierten glatten Muskelaktivität in Verbindung gebracht, die für vaskuläres Remodeling und fibroproliferative Prozesse relevant ist.

Caldesmon Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CALD1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CALD1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CALD1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CALD1-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.