CA V CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-419455

Übersicht

Car5a kodiert die mitochondriale Carboanhydrase V (CA V), ein Zink-Metalloenzym, das die reversible Hydratisierung von CO₂ katalysiert und dadurch im mitochondrialen Matrixraum Bicarbonat erzeugt. Dieses Bicarbonatangebot unterstützt anaplerotische und biosynthetische Reaktionen, indem es carboxylierungsabhängige Enzyme speist, und verknüpft Car5a damit mit Stoffwechselwegen wie der Glukoneogenese, der Ureagenese sowie dem Lipid- und Aminosäurestoffwechsel. In Mausgeweben mit hohem metabolischem Bedarf trägt die CA‑V‑Aktivität zur Regulation des mitochondrialen pH-Werts und des Kohlenstoffflusses bei und beeinflusst dadurch das zelluläre Energiegleichgewicht und die Homöostase von Metaboliten. Eine veränderte Funktion mitochondrialer Carboanhydrasen wurde mit metabolischer Dysregulation in Verbindung gebracht und kann im Kontext von Erkrankungen untersucht werden, die die Stickstoffverwertung und den Intermediärstoffwechsel betreffen.

Das CA V CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Car5a-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Car5a-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Car5a nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die CA V-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Car5a-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der CA V-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Car5a-Exone abzielen, die für die CA V-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Car5a-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom CA V CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom CA V CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Car5a-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das CA V HDR-Plasmid (m) und CA V HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Car5a-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Car5a-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.