CA IV CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-419454

Übersicht

Mouse Car4 kodiert die Carboanhydrase IV (CA IV), ein GPI-verankertes, extrazelluläres Enzym, das die reversible Hydratisierung von CO₂ zu Bicarbonat und Protonen katalysiert und damit die lokale pH-Regulation sowie den Bicarbonattransport unterstützt. Durch die funktionelle Kopplung an Ionentransportprozesse trägt CA IV zur CO₂/HCO₃⁻-Homöostase bei, die die Physiologie von Epithel- und Endothelzellen, den Gasaustausch und das Säure‑Basen‑Gleichgewicht im Mikroenvironment beeinflusst. Die Car4-Aktivität wird häufig im Zusammenhang mit der Bicarbonatverarbeitung in Lunge und Niere sowie mit Gewebereaktionen auf veränderte pH- und CO₂-Werte untersucht. Eine dysregulierte, carboanhydraseabhängige Pufferung kann Prozesse beeinflussen, die mit Entzündung, hypoxieassoziiertem Remodeling und Stoffwechselstress-Signalwegen verknüpft sind.

Das CA IV CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Car4-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Car4-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Car4 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die CA IV-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Car4-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der CA IV-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Car4-Exone abzielen, die für die CA IV-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Car4-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom CA IV CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom CA IV CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Car4-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das CA IV HDR-Plasmid (m) und CA IV HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Car4-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Car4-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.