C4BPα Double Nickase Plasmid (h): sc-404684-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das C4BPα Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- C4BPα Double-Nickase-Plasmid (h) und C4BPα Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf C4BPA abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: C4BPα: sc-398720
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
C4BPα Double Nickase Plasmid (h) | sc-404684-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
C4BPα Double Nickase Plasmid (h2) | sc-404684-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
C4BPA kodiert die Alphakette des C4b-bindenden Proteins (C4BPα), eines löslichen Regulators der klassischen und der Lektin-Komplementkaskade, der an C4b bindet und den Zerfall von C3-Konvertasen beschleunigt, um die Komplementamplifikation zu begrenzen. Indem C4BPα als Kofaktor für die faktor-I-vermittelte Spaltung von C4b dient, trägt es zur Aufrechterhaltung der Immunhomöostase bei und schützt Wirtsoberflächen vor überschießender, komplementvermittelter Entzündung. C4BPα ist außerdem an der Beseitigung von Immunkomplexen und apoptotischem Material beteiligt und kann opsonisationsabhängige Reaktionen an der Schnittstelle zwischen angeborener und adaptiver Immunität beeinflussen. Eine dysregulierte C4BPA/C4BPα-Aktivität wurde mit dem bei Autoimmun- und Entzündungserkrankungen beobachteten Komplementungleichgewicht in Verbindung gebracht sowie mit tumorgebundenen Mechanismen der Immunflucht, die in mehreren Krebs-Kontexten untersucht werden.
C4BPα Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des C4BPA-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von C4BPA abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die C4BPA-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit C4BPA-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.