Plasmide CRISPR d'Activation (m2) c-Maf: sc-421531-ACT-2

Le gène Maf de la souris code le facteur de transcription c‑Maf, un régulateur de type basic leucine zipper (bZIP) qui se lie aux éléments de reconnaissance MAF afin de contrôler des programmes d’expression génique dépendants du contexte. c‑Maf intègre des signaux issus des voies immunitaires et du développement pour moduler la différenciation et la fonction cellulaires, notamment la polarisation des lymphocytes T (en particulier les programmes Th2 et Tfh), les états d’activation des macrophages et des réseaux transcriptionnels spécifiques de lignée dans des tissus tels que le cristallin et les îlots pancréatiques. Une activité dérégulée de c‑Maf a été associée à une altération de l’homéostasie immunitaire et à des phénotypes inflammatoires, et elle est fréquemment étudiée dans des modèles de transformation lymphoïde ainsi que de dysfonctionnements métaboliques ou oculaires. L’édition du gène Maf dans des cellules murines ou chez la souris permet une analyse mécanistique de l’utilisation des enhancers, des circuits transcriptionnels et des cytokines et marqueurs de lignée en aval, au moyen d’approches CRISPR de knock‑out, knock‑in ou de perturbation régulatrice, couplées à l’RNA‑seq, au ChIP‑seq et à des analyses unicellulaires.

c-Maf Le plasmide d'activation CRISPR (m2) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Maf sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

c-Maf Le plasmide d'activation CRISPR (m2) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Maf dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Maf, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de c-Maf. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Maf natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de c-Maf au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie c-Maf dans les cellules tumorales présentant une expression de Maf silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.