BTG1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-405339

Übersicht

BTG1 (B-cell translocation gene 1) kodiert einen antiproliferativen Regulator, der das Fortschreiten des Zellzyklus und die zelluläre Ruhephase (Quieszenz) moduliert, mit bedeutenden Funktionen in der hämatopoetischen Differenzierung und der lymphoiden Homöostase. Das BTG1-Protein wirkt als transkriptioneller Koregulator und ist über Interaktionen mit Faktoren wie CAF1/CNOT7 an die mRNA-Deadenylierungsmaschinerie (CCR4–NOT-Komplex) gekoppelt, wodurch es die Stabilität von Transkripten und Programme der Genexpression mitprägt. Über diese Aktivitäten beeinflusst BTG1 Signalausgänge, die mit Stressantworten und Entwicklungskontrollpunkten verknüpft sind, einschließlich Signalwegen, die Proliferation, Apoptose und Differenzierung steuern. Veränderte BTG1-Expression oder genetische Läsionen werden wiederholt mit der Biologie lymphoider Malignome und mit Phänotypen des Therapieansprechens in Verbindung gebracht, was BTG1 zu einem nützlichen Ziel für mechanistische Studien tumor-suppressorähnlicher Prozesse und der transkriptionellen Kontrolle macht.

Das BTG1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des BTG1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des BTG1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von BTG1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die BTG1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von BTG1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der BTG1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf BTG1-Exone abzielen, die für die BTG1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere BTG1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom BTG1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom BTG1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des BTG1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das BTG1 HDR-Plasmid (h) und BTG1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von BTG1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten BTG1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.