Particules Lentivirales d'Activation (h) Brn-3b/BRN3B/POU4F2: sc-400382-LAC

POU4F2 (Brn-3b/BRN3B) est un facteur de transcription de type POU à homéodomaine qui contrôle des programmes d’expression génique spécifiques à certains types cellulaires, avec des rôles majeurs dans le développement, la différenciation et la survie des neurones. En se liant à des motifs régulateurs de l’ADN et en coordonnant des réseaux transcriptionnels, BRN3B influence des processus tels que le guidage axonal, la maturation synaptique et la transcription en réponse au stress. Dans les systèmes humains, des altérations de l’activité de POU4F2 sont utilisées pour étudier les mécanismes de régulation neurodéveloppementale et de spécification de lignage, et ses cibles en aval sont reliées à des voies qui gouvernent l’apoptose, le contrôle du cycle cellulaire et l’identité neuronale. Ces caractéristiques font de POU4F2 un nœud utile pour étudier la circuiterie transcriptionnelle dans des modèles neuronaux et des perturbations pertinentes pour la maladie affectant le destin et la résilience neuronaux.

Les particules d'activation lentivirales Brn-3b/BRN3B/POU4F2 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de POU4F2 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales Brn-3b/BRN3B/POU4F2 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription POU4F2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de Brn-3b/BRN3B/POU4F2. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif POU4F2 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.