BRD9 Double Nickase Plasmid (m): sc-430581-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das BRD9 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- BRD9 Double-Nickase-Plasmid (m) und BRD9 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Brd9 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
BRD9 Double Nickase Plasmid (m) | sc-430581-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
BRD9 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-430581-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Mouse Brd9 kodiert BRD9, einen bromodomänenhaltigen „Reader“ für Acetyl-Lysin-Markierungen, der als zentrale Untereinheit des nicht-kanonischen BAF-(ncBAF/GBAF)-Chromatin-Remodeling-Komplexes fungiert. Indem BRD9 die Erkennung von Histonacetylierung mit einer ATP-abhängigen Neupositionierung von Nukleosomen koppelt, trägt es zur Regulation der Zugänglichkeit von Enhancern und Promotoren, von Transkriptionsprogrammen und von Zellzustandsübergängen bei. Die BRD9-Aktivität greift über Chromatinorganisation und transkriptionsregulatorische Signalwege in die epigenetische Kontrolle von Proliferation, Differenzierung und DNA-Schadensantworten ein. Eine Fehlregulation des BRD9-assoziierten Chromatin-Remodelings wurde mit veränderter Linienfestlegung und onkogenen transkriptionellen Abhängigkeiten in Verbindung gebracht, wodurch Brd9 ein nützliches Ziel für mechanistische Studien zur Genomorganisation und krebsrelevanten Genregulation ist.
BRD9 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Brd9-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Brd9 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Brd9-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Brd9-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.