Bok CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-407699

Übersicht

BOK (BCL2-related ovarian killer) kodiert Bok, ein proapoptotisches Mitglied der BCL-2-Proteinfamilie, das zur intrinsischen Apoptose beiträgt, indem es die Permeabilisierung der äußeren Mitochondrienmembran und die nachgeschaltete Aktivierung von Caspasen beeinflusst. Bok wird mit der Biologie des endoplasmatischen Retikulums und der mitochondrienassoziierten Membranen in Verbindung gebracht und greift in Stressantwort-Signalwege ein, die Proteostase und Entscheidungen über das Zellschicksal miteinander verknüpfen. Aufgrund dieser Funktionen wird BOK in Kontexten untersucht, in denen Apoptoseschwellen und die Empfindlichkeit gegenüber zellulärem Stress verändert sind, darunter Krebsbiologie, stressassoziierte Signalgebung bei Neurodegeneration und Gewebehomöostase. Seine Regulation und funktionelle Überschneidung mit anderen BCL-2-Familienproteinen machen es zu einem nützlichen Knotenpunkt, um Redundanzen in Signalwegen und apoptotische Vorprägung („apoptotic priming“) zu analysieren.

Das Bok CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des BOK-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des BOK-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von BOK nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Bok-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von BOK-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Bok-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf BOK-Exone abzielen, die für die Bok-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere BOK-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Bok CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Bok CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des BOK-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Bok HDR-Plasmid (h) und Bok HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von BOK-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten BOK-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.