BMP-6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401979
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- BMP-6 Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im BMP-6-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: BMP-6: sc-57042
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
BMP-6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) | sc-401979 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
BMP6 kodiert das Bone Morphogenetic Protein 6 (BMP-6), einen sezernierten Liganden aus der TGF-β-Superfamilie, der hauptsächlich über BMP-Typ-I/II-Serin/Threonin-Kinase-Rezeptoren signalisiert und dadurch SMAD1/5/8-abhängige Transkriptionsprogramme aktiviert. BMP-6 trägt zur osteogenen und chondrogenen Differenzierung, zur Regulation der extrazellulären Matrix und zum Gewebeumbau bei und ist zudem in Signalzusammenhänge der Entwicklungsmusterung sowie fibrosisassoziierter Prozesse eingebunden. In der Eisenhomöostase ist BMP-6 ein zentraler upstream-Regulator der hepatischen Hepcidin-Expression über den BMP/SMAD-Signalweg und verknüpft damit die BMP6-Aktivität mit dem systemischen Eisenhaushalt. Eine Fehlregulation der BMP6-Signalisierung wurde mit Erkrankungen in Verbindung gebracht, die mit aberranter Mineralisierung, Fibrose und verändertem Eisenstoffwechsel einhergehen, was mechanistische Untersuchungen in geeigneten Zellmodellen unterstützt.
Das BMP-6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des BMP6-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des BMP6-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von BMP6 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die BMP-6-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von BMP6-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der BMP-6-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf BMP6-Exone abzielen, die für die BMP-6-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere BMP6-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom BMP-6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom BMP-6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des BMP6-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das BMP-6 HDR-Plasmid (h) und BMP-6 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von BMP6-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten BMP6-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.