BMP-4 Lentiviral Activation Particles (h): sc-400543-LAC

Human BMP4 kodiert das Knochenmorphogeneseprotein 4 (BMP-4), einen sezernierten Liganden der TGF-β-Superfamilie, der über BMP-Rezeptoren vom Typ I/II signalisiert und dadurch SMAD1/5/8 sowie nachgeschaltete Transkriptionsprogramme aktiviert. BMP-4 reguliert die embryonale Musterbildung, die Mesoderminduktion, die osteogene und chondrogene Differenzierung sowie die Festlegung von Zelllinien in unterschiedlichen Gewebekontexten. Über die kanonische SMAD-Signalübertragung hinaus kann BMP-4 mit MAPK-, WNT- und NOTCH-Signalwegen interagieren und so Zellschicksalsentscheidungen, Morphogenese und den Umbau der extrazellulären Matrix beeinflussen. Eine fehlregulierte BMP4/BMP-4-Aktivität wird mit Entwicklungsstörungen und krankheitsrelevanten Prozessen wie Fibrose, vaskulärem Remodeling und differenzierungsbezogenen Signalen im Tumormikromilieu in Verbindung gebracht, was seinen Einsatz in mechanistischen Signalwegstudien unterstützt.

BMP-4 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente BMP4-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

BMP-4 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der BMP4-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen BMP-4-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen BMP4-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.