BLOS2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406776

Übersicht

BLOC1S2 kodiert BLOS2, eine zentrale Untereinheit des „biogenesis of lysosome-related organelles complex-1“ (BLOC-1), der den endosomalen Transport und die Sortierung von Fracht koordiniert. Über die Interaktionen von BLOC-1 mit Adaptorkomplexen und dem zytoskelettalen Transportapparat trägt BLOS2 zur Weiterleitung von Membranproteinen zu Endosomen, Lysosomen und lysosomenverwandten Organellen bei und beeinflusst dadurch die Vesikelreifung und die zelluläre Homöostase. Eine Störung von BLOC-1-Komponenten wurde mit verändertem Neuritenauswuchs, der Dynamik synaptischer Vesikel sowie Defekten in Pigmentierungswegen in Verbindung gebracht, die von spezialisierten Organellen wie Melanosomen abhängen. Entsprechend wird BLOC1S2 im Kontext intrazellulärer Transportstörungen und der Neurobiologie untersucht, da Beeinträchtigungen des Endolysosomenwegs Signalübertragung und Proteostase beeinflussen können.

Das BLOS2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des BLOC1S2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des BLOC1S2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von BLOC1S2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die BLOS2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von BLOC1S2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der BLOS2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf BLOC1S2-Exone abzielen, die für die BLOS2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere BLOC1S2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom BLOS2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom BLOS2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des BLOC1S2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das BLOS2 HDR-Plasmid (h) und BLOS2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von BLOC1S2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten BLOC1S2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.