Plasmide Double Nickase (h) BLM: sc-400896-NIC

BLM code une hélicase de l’ADN de la famille RecQ qui préserve la stabilité du génome en déroulant des structures secondaires aberrantes de l’ADN et en coordonnant la résection des extrémités d’ADN lors de la recombinaison homologue. BLM agit avec le complexe BTRR (BLM–TOP3A–RMI1/2) pour dissoudre les doubles jonctions de Holliday, limitant les événements de crossing-over et favorisant une ségrégation fidèle des chromosomes. Elle est intégrée aux voies de contrôle du checkpoint de phase S, de redémarrage des fourches de réplication bloquées et de maintenance des télomères, qui limitent les cassures chromosomiques et les échanges entre chromatides sœurs. La perte ou le dysfonctionnement de BLM perturbe les réponses au stress réplicatif et est associé, dans des modèles expérimentaux, aux phénotypes d’instabilité génomique du syndrome de Bloom ainsi qu’à une prédisposition accrue au cancer.

BLM Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus BLM dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de BLM. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de BLM. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de BLM.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.