BICD1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-410704-ACT

BICD1 (bicaudal D homolog 1) ist ein Coiled-Coil-Adapterprotein, das zytoplasmatische Dynein–Dynactin-Motoren mit Fracht verbindet und so den zum Minus-Ende gerichteten Mikrotubuli-Transport koordiniert. Es trägt zur Positionierung von Vesikeln und Organellen, zur Organisation des Golgi-Apparats sowie zum centrosomenassoziierten Transport bei und unterstützt damit Prozesse wie Zellpolarität und mitotische Progression. Über seine Funktion in intrazellulären Transportnetzwerken kann BICD1 die Signaldynamik beeinflussen, indem es die Bewegung und räumliche Organisation von Rezeptoren und Endosomen steuert. Eine Fehlregulation der Dynein-Adapterfunktion ist allgemein relevant für zelluläre Stressantworten und für Phänotypen, die in der neuroentwicklungs- und neurodegenerationsbezogenen Forschung beobachtet werden.

BICD1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen BICD1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

BICD1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des BICD1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der BICD1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen BICD1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native BICD1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von BICD1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des BICD1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem BICD1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.