beta-catenin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400038-ACT

CTNNB1 codifica a β-catenina, uma proteína multifuncional que conecta junções aderentes dependentes de caderina ao citoesqueleto de actina e atua como um co-regulador transcricional central na sinalização canônica de Wnt. Em resposta à ativação da via Wnt, a β-catenina estabilizada se acumula no núcleo e se associa a fatores TCF/LEF para controlar programas gênicos que regulam proliferação, diferenciação e estados celulares semelhantes a células-tronco. A atividade de CTNNB1 é integrada à dinâmica do complexo de destruição APC/AXIN/GSK3β e cruza com vias que controlam a organização epitelial e decisões de destino celular. A desregulação da sinalização de β-catenina e alterações na adesão célula–célula são frequentemente implicadas na transformação oncogênica e em distúrbios do desenvolvimento, tornando CTNNB1 um alvo comum para estudos mecanísticos em sinalização e biologia celular.

beta-catenin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CTNNB1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

beta-catenin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CTNNB1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CTNNB1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de beta-catenin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CTNNB1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de beta-catenin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via beta-catenin em células tumorais com expressão de CTNNB1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.