Plasmide CRISPR d'Activation (h) Bcl-9: sc-404408-ACT

BCL9 code pour Bcl-9, un coactivateur transcriptionnel qui couple la β-caténine aux facteurs de liaison à l’ADN TCF/LEF afin d’amplifier la sortie de la signalisation canonique Wnt. En régulant des programmes géniques répondant à Wnt, Bcl-9 influence les décisions de destinée cellulaire, la prolifération et la différenciation, avec en outre des rôles dans le contrôle transcriptionnel associé à la chromatine. Une expression ou une activité dérégulée de BCL9 a été associée à l’activation aberrante de la voie Wnt/β-caténine observée dans de nombreux cancers et dans des contextes développementaux, ce qui en fait un nœud utile pour étudier la dépendance à la voie et le remodelage transcriptionnel.

Bcl-9 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de BCL9 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Bcl-9 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus BCL9 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription BCL9, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Bcl-9. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus BCL9 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Bcl-9 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Bcl-9 dans les cellules tumorales présentant une expression de BCL9 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.