Bcl-6 CRISPR Activation Plasmid (h2): sc-400265-ACT-2

Das humane BCL6-Gen kodiert den transkriptionellen Repressor Bcl-6, ein BTB/POZ-Zinkfingerprotein, das die Differenzierung, Proliferation und das Überleben von B-Zellen im Keimzentrum reguliert, indem es Korepressor-Komplexe (z. B. SMRT/NCoR, BCOR) rekrutiert, um Zielgene zu silenzieren. Bcl-6 integriert Signale aus B-Zell-Rezeptor- und Zytokin-Signalwegen, um Programme zu modulieren, die DNA-Schadensantworten, Apoptose und Zellzyklus-Kontrollpunkte steuern, und prägt damit die Affinitätsreifung von Antikörpern. Eine dysregulierte Expression oder Aktivität von BCL6 ist stark mit aus dem Keimzentrum stammenden lymphoiden Malignomen und veränderter Immunregulation assoziiert, was BCL6 zu einem zentralen Knotenpunkt in der Erforschung onkogener transkriptioneller Netzwerke macht. Das Gene Editing von BCL6 wird широко eingesetzt, um transkriptionelle Schaltkreise zu analysieren, Enhancer-Promotor-Abhängigkeiten zu kartieren und die funktionellen Konsequenzen regulatorischer Varianten in Immun- und Krebsmodellsystemen zu bewerten.

Bcl-6 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h2) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen BCL6-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Bcl-6 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h2) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des BCL6-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der BCL6-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Bcl-6-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native BCL6-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Bcl-6-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Bcl-6-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem BCL6-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.