Plasmide Double Nickase (h) Bak: sc-400646-NIC

BAK1 code Bak, un effecteur pro-apoptotique de la famille BCL-2 localisé à la membrane externe de la mitochondrie, et favorise la perméabilisation de cette membrane en réponse à un stress cellulaire. Lorsqu’il est activé, Bak subit un changement de conformation et s’oligomérise, ce qui permet la libération du cytochrome c et l’activation en aval des caspases au sein de la voie intrinsèque de l’apoptose. La fonction de Bak est étroitement régulée par des interactions avec des protéines BH3-only et des facteurs anti-apoptotiques tels que BCL-2 et BCL-XL, ce qui le relie au contrôle, par des points de contrôle, de la survie cellulaire et des réponses au stress. Un dérèglement de l’apoptose médiée par BAK1 a été impliqué dans la modification des seuils de mort cellulaire observée dans des contextes de recherche sur la biologie des cancers, la neurodégénérescence et l’homéostasie immunitaire.

Bak Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus BAK1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de BAK1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de BAK1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de BAK1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.