Plásmido Doble Nickase (m) BACE: sc-423847-NIC

El gen murino **Bace1** codifica la enzima 1 de corte del precursor de la proteína amiloide en el sitio β (**BACE**), una proteasa aspártica que inicia el procesamiento amiloidogénico de APP al generar el fragmento C99, que posteriormente es escindido por la γ-secretasa. La actividad de BACE se relaciona con el tráfico endosomal y la proteólisis intramembrana regulada, y contribuye a la proteostasis y al recambio de proteínas de membrana en neuronas y otros tipos celulares. Las alteraciones en la expresión o la actividad de **Bace1** se han vinculado con la producción de amiloide-β y la disfunción sináptica, lo que lo convierte en una diana ampliamente utilizada para estudios mecanísticos de vías relevantes para la neurodegeneración. La modulación experimental de **Bace1** permite investigar la dinámica del procesamiento de APP, la función endolisosomal y los cambios de señalización aguas abajo en sistemas modelo celulares y de ratón.

BACE El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Bace1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Bace1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Bace1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Bace1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.