B-ATF CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401553-ACT

BATF (B-ATF) ist ein Transkriptionsfaktor mit basischem Leucin-Zipper, der mit Proteinen der JUN-Familie Heterodimere bildet, an AP-1‑ähnliche regulatorische Elemente bindet und linien-/zelltypspezifische Genexpressionsprogramme prägt. In menschlichen Immunzellen ist BATF ein zentraler Regulator der T‑Zell-Differenzierung und der Effektorfunktion, einschließlich Signalwege, die die Zytokinproduktion, die Biologie follikulärer T‑Helferzellen (Tfh) und die adaptive Immunaktivierung steuern. Durch die Kooperation mit Mitgliedern der IRF-Familie an zusammengesetzten DNA-Motiven beeinflusst BATF die Chromatinzugänglichkeit und Transkriptionsnetzwerke, die Immunsignale und zelluläre Stressantworten koordinieren. Eine fehlregulierte BATF-Aktivität wurde mit veränderten Immunphänotypen in Verbindung gebracht und in lymphoiden Kontexten sowohl an Mechanismen entzündlicher Erkrankungen als auch an onkogenen Transkriptionszuständen beteiligt, was BATF zu einem nützlichen Knotenpunkt für mechanistische Studien der Transkriptionskontrolle macht.

B-ATF Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen BATF-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

B-ATF Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des BATF-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der BATF-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen B-ATF-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native BATF-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von B-ATF-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des B-ATF-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem BATF-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.