Plasmide CRISPR d'Activation (h) Axl: sc-400393-ACT

Le gène humain **AXL** code Axl, un récepteur tyrosine kinase de la famille TAM, activé par des ligands tels que **GAS6**, qui régule la survie, la prolifération et la migration cellulaires, ainsi que l’élimination des cellules apoptotiques. La signalisation d’Axl mobilise des nœuds des voies **PI3K–AKT**, **MAPK/ERK** et **NF-κB**, et contribue à la transition épithélio-mésenchymateuse, au remodelage du cytosquelette et à la modulation des réponses immunitaires innées. Une expression ou une activité d’AXL dérégulée a été associée à des phénotypes tumoraux invasifs, à des interactions stroma–système immunitaire altérées et à des états de signalisation de type résistance dans plusieurs modèles de cancer. Au-delà de l’oncologie, le contrôle, médié par Axl, du tonus inflammatoire et des programmes phagocytaires relie AXL à la fibrose, à la biologie vasculaire et à une régulation immunitaire pertinente pour les maladies infectieuses dans des systèmes expérimentaux.

Axl Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de AXL sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Axl Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus AXL dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription AXL, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Axl. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus AXL natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Axl au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Axl dans les cellules tumorales présentant une expression de AXL silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.