Partículas Lentivirales de Activación (m) Autotaxin: sc-422180-LAC

Enpp2 codifica la autotaxina, una lisofosfolipasa D secretada que convierte la lisofosfatidilcolina en ácido lisofosfatídico (LPA), un mediador lipídico bioactivo que señaliza a través de los receptores de LPA para regular la migración celular, la remodelación del citoesqueleto, la proliferación y la supervivencia. En tejidos de ratón, la señalización autotaxina–LPA contribuye al desarrollo vascular y linfático, al tráfico de células inmunitarias y a la remodelación de la matriz extracelular, integrándose con cascadas de señalización de GPCR como RhoA/ROCK, PI3K–AKT y MAPK/ERK. La actividad desregulada de ENPP2/autotaxina y la producción de LPA se han vinculado a procesos inflamatorios y fibróticos, y se han estudiado en la biología del microambiente tumoral, la angiogénesis y fenotipos asociados a la metástasis. Como enzima soluble, la autotaxina también constituye un punto de intervención manejable para investigar la dinámica de la señalización lipídica en medios condicionados y en el espacio extracelular.

Las partículas de activación lentiviral Autotaxin (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Enpp2 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral Autotaxin (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Enpp2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de Autotaxin. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Enpp2 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.