AT_1a CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-419048

Übersicht

Agtr1a kodiert den murinen Angiotensin‑II‑Rezeptor vom Typ 1A (AT1a), einen siebenfach transmembranären GPCR, der die Angiotensin‑II‑Signalübertragung in vaskulären, renalen, kardialen und neuronalen Geweben vermittelt. Nach Ligandenbindung koppelt AT1a vorwiegend an Gq/11, aktiviert die Phospholipase C, erhöht das intrazelluläre Ca2+ und stimuliert PKC‑abhängige Signalwege; zugleich werden MAPK/ERK‑Kaskaden sowie β‑Arrestin‑verknüpfte Signalwege aktiviert, die Transkriptionsprogramme beeinflussen. Dieser Rezeptor integriert Signale des Renin‑Angiotensin‑Systems mit zellulären Prozessen wie der Regulation des Gefäßtonus, der Natrium‑ und Flüssigkeitshomöostase, oxidativen Stressantworten und inflammatorischer Signalgebung. Eine fehlregulierte Aktivität des AT1a‑Signalwegs wird häufig als mechanistische Achse in Modellen für Hypertonie, kardiale Hypertrophie und Remodelling, Nierenschädigung und vaskuläre Dysfunktion genutzt, wodurch Agtr1a ein gängiges Ziel für die Aufklärung von Signalwegen in der kardiovaskulären und renalen Biologie ist.

Das AT1a CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Agtr1a-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Agtr1a-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Agtr1a nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die AT1a-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Agtr1a-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der AT1a-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Agtr1a-Exone abzielen, die für die AT1a-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Agtr1a-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom AT1a CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom AT1a CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Agtr1a-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das AT1a HDR-Plasmid (m) und AT1a HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Agtr1a-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Agtr1a-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.