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ATR慢病毒激活颗粒(m) | sc-434115-LAC | 200 µl | $455.00 |
小鼠 Atr 基因编码 ATR,这是一种 PI3K 样丝氨酸/苏氨酸激酶,负责在复制压力和单链 DNA 条件下协调 DNA 损伤应答。ATR 通过依赖 ATRIP 和 TOPBP1 的募集而被激活,并主要通过 CHK1 传递信号,以稳定停滞的复制叉、调控复制起始点(origin)启动,并协同 S 期及 G2/M 期检查点控制。该通路与范可尼贫血(Fanconi anemia)通路组分、同源重组因子以及细胞周期调控因子相互衔接,从而维持基因组完整性。ATR 信号通路的破坏或失调常被用于建立模型,以研究基因组不稳定、复制相关 DNA 损伤以及与肿瘤生物学和小鼠发育表型相关的应激适应性增殖程序的机制。
ATR 慢病毒激活颗粒(m)通过将完整的协同激活介导体(SAM)转录激活系统包装到可直接转导的高滴度慢病毒颗粒中,满足了这一需求,从而能够在更广泛的人类细胞类型中高效上调 Atr 表达。
ATR 慢病毒激活颗粒(m)通过慢病毒转导递送协同激活介导体(SAM)系统的所有功能组分。该系统包含三种共同转导至靶细胞的颗粒制剂:一种编码与VP64转激活域融合的无催化活性的dCas9(D10A和N863A突变),并携带布拉西定抗性基因; 一种编码MS2-p65-HSF1融合蛋白并携带潮霉素抗性基因的制剂;以及一种编码靶标特异性20 nt sgRNA(与两个MS2 RNA适配体融合)并携带嘌呤霉素抗性基因的制剂。经过慢病毒转导和表达盒的基因组整合后,SAM组分得以稳定表达,并在Atr转录起始位点上游的近端启动子区域内的靶位点组装。在此处,VP64、p65和HSF1协同作用,招募内源性转录 machinery,从而驱动内源性ATR表达的持续上调。使用无核酸酶活性的 dCas9 可避免引入双链 DNA 断裂,并保留原生的 Atr 基因组位点和调控架构。
慢病毒载体具有多项实用优势:稳定的基因组整合支持细胞分裂过程中的可遗传激活;高滴度颗粒制剂免去了内部病毒生产的需要;且与原代细胞、非增殖细胞及转染抗性细胞类型的兼容性,扩大了实验的可及性。可通过嘌呤霉素、潮霉素和布拉西定进行三重抗生素筛选,以确认并富集成功的转导。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。