ATP7A CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419259

概要

Atp7a は ATP7A をコードしており、ATP7A は P 型 ATPase に属する銅トランスポーターで、銅濃度に応答してトランスゴルジネットワークと細胞膜の間をシャトル移行することで、細胞内の銅分配を調節します。分泌経路酵素への銅の供給および銅の細胞外排出の促進を通じて、ATP7A は、酸化ストレス制御、細胞外マトリックスの架橋、ならびに銅酵素（クプロ酵素）の成熟を介した鉄恒常性など、銅依存性プロセスを支えます。ATP7A の働きは、小胞輸送、金属イオン恒常性、レドックスシグナル伝達経路と交差しており、その機能不全は全身および細胞レベルの銅バランスを乱します。マウスモデルでは、Atp7a 機能の変化を利用して、銅依存性の神経発達および結合組織の表現型の機序や、より広範な代謝ストレス応答を研究します。

ATP7A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるAtp7a遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Atp7a内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Atp7aのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、ATP7Aタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、ATP7Aシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Atp7a欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• ATP7Aの機能に不可欠なAtp7aエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Atp7aゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• ATP7A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびATP7A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Atp7a遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  ATP7A HDRプラスミド（m）および ATP7A HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはAtp7aホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のAtp7a標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。