ATP7A Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419259

Descripción general

Atp7a codifica ATP7A, una ATPasa de tipo P transportadora de cobre que regula la distribución intracelular de este metal al desplazarse entre la red trans-Golgi y la membrana plasmática en respuesta a los niveles de cobre. Al suministrar cobre a enzimas de la vía secretora y favorecer el eflujo de cobre, ATP7A sustenta procesos dependientes de cobre, como el control del estrés oxidativo, el entrecruzamiento de la matriz extracelular y la homeostasis del hierro mediante la maduración de cuproenzimas. La actividad de ATP7A se conecta con el tráfico vesicular, la homeostasis de iones metálicos y las vías de señalización redox, y su disfunción altera el equilibrio sistémico y celular del cobre. En modelos murinos, la función alterada de Atp7a se utiliza para estudiar mecanismos de fenotipos neurodel desarrollo y del tejido conectivo dependientes del cobre, así como respuestas más amplias al estrés metabólico.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO ATP7A (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Atp7a en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Atp7a junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Atp7a tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína ATP7A.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Atp7a para la investigación de la señalización de ATP7A, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Atp7a críticos para la función de ATP7A
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Atp7a para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido ATP7A CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido ATP7A CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Atp7a. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR ATP7A (m) y el plásmido HDR ATP7A (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Atp7a para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Atp7a definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.