ATP6V0E1 Lentiviral Activation Particles (h): sc-411234-LAC

ATP6V0E1 kodiert die V-ATPase-V0-Untereinheit E1, eine zentrale Komponente der vakuolären H\+-ATPase, die die ATP-Hydrolyse mit der Protonentranslokation über Endomembransysteme koppelt. Durch die Ansäuerung von Endosomen, Lysosomen und sekretorischen Vesikeln unterstützt ATP6V0E1 die rezeptorvermittelte Endozytose, die Aktivität lysosomaler Hydrolasen, den Proteinabbau und die Autophagie und trägt zum pH-abhängigen Transport innerhalb des Golgi–Endosomen-Netzwerks bei. Die V-ATPase-Funktion ist zudem mit Nährstoffsensorik- und Proteostase-Signalwegen verknüpft, einschließlich der mTORC1-Regulation an der lysosomalen Oberfläche sowie Stressantworten, die mit dem Säure-Basen-Gleichgewicht von Organellen zusammenhängen. Eine dysregulierte vesikuläre Ansäuerung und Störungen von V-ATPase-Untereinheiten sind mit zellulären Phänotypen assoziiert, die für Neurodegeneration, den Stoffwechsel und die Invasion von Krebszellen sowie für Immun-Signalwege relevant sind, die von der endolysosomalen Prozessierung abhängen.

ATP6V0E1 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente ATP6V0E1-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

ATP6V0E1 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der ATP6V0E1-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen ATP6V0E1-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen ATP6V0E1-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.