ATP13A3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-413173

Übersicht

ATP13A3 kodiert eine P5-Typ-ATPase, die an der Kationenhomöostase und am Membrantransport innerhalb des endolysosomalen Systems beteiligt ist und so zur Regulation des vesikulären Transports sowie zur Integrität intrazellulärer Kompartimente beiträgt. Durch die Beeinflussung von Ionengradienten und der Organellenfunktion kann ATP13A3 zelluläre Stressantworten, metabolische Anpassungen und Signalprozesse, die mit der Membrandynamik verknüpft sind, modulieren. Eine veränderte ATP13A3-Aktivität wurde mit der kardiovaskulären und pulmonal-vaskulären Biologie in Verbindung gebracht, einschließlich berichteter genetischer Zusammenhänge bei der pulmonal-arteriellen Hypertonie, was ihre Relevanz für Studien zum vaskulären Remodeling und zur Endothelzellfunktion unterstreicht. Seine Expression und die vermutete Rolle bei der Aufrechterhaltung der zellulären Homöostase machen es zudem relevant für die Untersuchung von Mechanismen der Proliferation, des Überlebens und transportabhängiger Signalwege.

Das ATP13A3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des ATP13A3-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des ATP13A3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von ATP13A3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ATP13A3-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von ATP13A3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ATP13A3-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf ATP13A3-Exone abzielen, die für die ATP13A3-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere ATP13A3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ATP13A3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom ATP13A3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des ATP13A3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ATP13A3 HDR-Plasmid (h) und ATP13A3 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von ATP13A3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten ATP13A3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.