ATP11C Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-435843

Descripción general

Atp11c codifica ATP11C, una flipasa de fosfolípidos P4-ATPasa que mantiene la asimetría lipídica de la membrana plasmática al translocar aminofosfolípidos como la fosfatidilserina desde la monocapa externa a la interna. Esta actividad sustenta el tráfico vesicular, la endocitosis y los procesos de remodelación de membranas que influyen en la señalización de receptores y en programas de supervivencia celular. En el ratón, la función de ATP11C se ha vinculado con la homeostasis del sistema hematopoyético e inmunitario; su alteración afecta el desarrollo de las células B y la biología eritroide, lo que la hace relevante para estudios de fenotipos tipo inmunodeficiencia y de mecanismos relacionados con la anemia. La distribución alterada de lípidos de membrana controlada por ATP11C también puede modular la eliminación de células apoptóticas y la señalización inflamatoria mediante la exposición de fosfatidilserina en la superficie celular.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO ATP11C (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Atp11c en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Atp11c junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Atp11c tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína ATP11C.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Atp11c para la investigación de la señalización de ATP11C, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Atp11c críticos para la función de ATP11C
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Atp11c para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido ATP11C CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido ATP11C CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Atp11c. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR ATP11C (m) y el plásmido HDR ATP11C (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Atp11c para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Atp11c definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.