ATP11B Lentiviral Activation Particles (h): sc-411692-LAC

ATP11B kodiert eine P4-ATPase-Phospholipid-Flippase, die dazu beiträgt, die Lipid-Asymmetrie der Plasma- und Organellmembranen aufrechtzuerhalten, indem sie Aminophospholipide ATP-abhängig über Lipiddoppelschichten transloziert. Durch die Regulation der Membranzusammensetzung beeinflusst ATP11B die Vesikelbildung sowie endosomale Transport- und Recyclingprozesse, die mit dem Golgi–Endosomen-Transport und der Dynamik des gesamten sekretorischen Wegs verknüpft sind. Störungen der Lipid-Asymmetrie und des Membranverkehrs können Signalübertragung, Zellpolarität und Stressantworten beeinträchtigen, wodurch ATP11B für Studien zur Membranhomöostase und zu transportassoziierten Phänotypen relevant ist. Veränderte ATP11B-Aktivität oder -Expression wurde im Kontext krankheitsrelevanter zellulärer Eigenschaften untersucht, etwa im Zusammenhang mit Arzneistoffhandling, Überleben unter Stress und Veränderungen der intrazellulären Verteilung von Membranproteinen.

ATP11B Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente ATP11B-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

ATP11B Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der ATP11B-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen ATP11B-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen ATP11B-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.